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一. Folin——酚試劑甲
溶液1):1:2g無(wú)水碳酸鈉溶于100m10.2mol/l氫氧化鈉中（以配制成 5X),用時(shí)稀釋5倍。
溶液2）:0.5g 五水硫酸銅溶于100ml1％酒石酸鉀鈉（或酒石酸鈉）溶液。將稀釋后
的溶液 1 與溶液 2 ，以50:1的比例混合。混合后即為Folin——酚試劑甲，此試劑只
能用一天，過(guò)期失效。
二.Folin——酚試劑乙
原溶液度為2moL/L使用前需稀釋一倍，用多少稀釋多少，使其zui后濃度為 1moL/L,
此為Folin——酚試劑乙應(yīng)用液。Folin——酚試劑乙原液平時(shí)應(yīng)封閉貯存于 4°C冰箱
中避光
保存。
三.操作方法
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取14支試管分成兩組，按下表順序加入試劑，混勻，于室溫
放置10分鐘。再加入0.5毫升試劑乙，立即搖勻，在室溫放置 30 分鐘，然后于
500nm 處比色。測(cè)定光密度值。取兩種測(cè)定的平均值，以蛋白質(zhì)濃度為橫座標(biāo)，
光密度值為
縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為
定量的依據(jù)。
試劑/管號(hào) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
BSA/ml(250ug/ml | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸餾水/ml | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
試劑甲/ml | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
試劑乙/ml | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
樣品測(cè)定：
（1）取 1 毫升樣品溶液（約含 20-250微克多肽或蛋白質(zhì))加入 5 毫升試劑甲混勻，
于溫室放置 10 分鐘。
（2）加入0.5毫升試劑乙（Folin——酚），立即搖勻，于室溫保溫 30 分鐘：然后
500nm處比色，以 1 毫升水代替樣品作空白對(duì)照。測(cè)定后，可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出
未知樣品濃度。若用 0.5 厘米光程的比色杯進(jìn)行比色，可按下面方法進(jìn)行操作：取
0.2 毫升樣品溶液（約含 5-100微克多肽或蛋白質(zhì)），加入 1 毫升試劑甲（可選用
0.3-0.5 厘米直徑的小試管）混勻，10分鐘以后，再加入 0.1 毫升試劑乙，立刻混
勻，30 分鐘后比色一般來(lái)說(shuō)，若多肽或蛋白質(zhì)濃度在 2-25 微克，則采用波長(zhǎng)
755nm，而 25 微克以上則采用 500nm 比色為宜。
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